细胞功能检测

 

 

MTT、CCK8法
 
MTT是3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide的简称,商品名为噻唑蓝。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
然后采用二甲基亚砜(DMSO)溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在570 nm波长处测定其光吸收值,反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
 
CCK8法原理是WST-8四唑盐(2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)- 3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium)能被活细胞内的脱氢酶还原成橙色甲臜染料,
然后测定450 nm下的吸光值,生成的甲臜的量与活细胞数量成正比。
CCK8法可以做6天左右的生长曲线,1-6天每天收取细胞样本检测。
也可以类似MTT法,在相同时间比较不同处理组。
 
 

 

 

BrdU、EdU法
 
BrdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,
可以代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中,
这种置换可以稳定存在,并传递到子细胞中。
细胞经固定和变性处理后,可以用免疫学方法检测DNA中的BrdU的含量,从而判断细胞的增殖能力。
 
EdU也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,
能够在细胞增殖过程中代替胸腺嘧啶插入正在复制的DNA中。
EdU与荧光染料可以特异性地反应检测DNA的复制。
 
 

 

 

CFSE检测
 
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)是一种可以穿透细胞膜的荧光染料,
具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺酯基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团。
CFSE被细胞吸收后,不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到蛋白质上。
随着细胞增殖分裂,细胞内CFSE的含量被平均分配到两个子细胞中,子细胞荧光强度减半。
随着细胞的增殖,CFSE不断被稀释,使用流式细胞仪对CFSE进行检测,可以对细胞的增殖进行分析。
 
 
 
 

 

 

免疫组化检测
 
使用免疫组化的方法对细胞增殖相关抗原-Ki-67、PCNA进行检测。
这类标志物只表达在增殖细胞中,常用于反映体内肿瘤细胞的增殖能力。
 
 
 
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